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sigma試劑血清

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應用領域醫療衛生,化工,生物產業,農業,石油

sigma試劑血清中缺少抗A、B血型抗原的抗體,常用于使免疫反應降到。已經證實,人AB血清可以提高多數人來源細胞生長速率,并且使用濃度比混合型血清更低。更適用于細胞、組織器官培養、細胞株保藏、單抗研制。

1、sigma試劑血清來源 :可從世界各地收集胎牛血清,但必須符合其質量標準和美國農業部進口要求;

2、血清的收集:必須符合工業生產的標準,低溫采集,一次分離,分離后立即混合凍存;

3、血清的制備:超低IgG胎牛血清、透析血清、γ-射線輻照;

4、除菌過濾:0.22μm和0.1μm濾膜過濾;

5、成品分裝:根據需要分裝成不同規格。

牛血清的使用所產生的常見問題

(一)由于血清營養豐富,貯存條件特殊,因此在貯存和使用過程中容易產生以下問題:

1、改變培養液的pH值

牛血清的pH理論值為7.0~8.0,培養基在加入規定量的試劑后(即達到細胞生長所需要的滲透壓),再加入10%的牛血清,一般會使培養液的pH值發生改變。因此在使用過程中應注意pH的變化,如有必要可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調pH到所需值。

2、由于血清的營養成分豐富,非常適合細菌、真菌和支原體等生長。國產血清大部分采用手工分裝,因此容易把微生物帶入而使得血清被污染。使用前如果沒有及時發現,將會把污染物帶入正在培養的細胞中,而使得細胞不能正常生長。

3、血清在貯存解凍過程中會產生沉淀,這是由于血清中含有大量脂蛋白、纖維蛋白及多肽類物質,在-15℃冷凍保存解凍后就會自然形成沉淀,隨著保存時間的延長,沉淀量會增加。因此在融化血清時一般應先在4℃放置使之解凍,然后放在室溫使血清*融化,以避免沉淀的增加。添加血清時應避免把沉淀加入培養液,否則由于沉淀的存在會使得所培養的細胞產生大量黑點,或者細胞表面將會覆蓋一層油狀物質,影響細胞的正常生長。為減少血清的損失,可以把有沉淀的血清收集起來進行離心處理,將上清液加入培養液使用(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。

(二)大規模細胞培養中牛血清對細胞及病毒滴度的影響

血清是一種成分復雜的混合物,不同批次血清對細胞生長的促進作用不同。大規模細胞培養中由血清引起的細胞生長狀態不佳及病毒滴度的影響表現在以下幾個方面:

1、細胞生長速度緩慢,長滿單層時間長;從同一細胞瓶中分出兩瓶細胞,用同一種培養液,分別加入10%的對照血清和待檢血清,在相同條件下培養72小時,會出現對照血清長滿單層,而待檢血清大約只有60~70%,這種血清就不適合用來大規模培養細胞。

2、細胞傳代后形態不正常,細胞狀態發生變化 ;由于血清的質量問題,使原本狀態正常的細胞經傳代后形態會變差;比如:細胞瓶里會出現一些蠕動的小黑點(并非污染),或者細胞表面形成一層油狀覆蓋物;細胞的輪廓變得模糊,細胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒填充,從而影響細胞向四周擴展生長。

3、細胞傳幾代后就出現脫壁現象,不能連續傳代 ;質量較差的血清缺乏某種細胞的貼壁因子,會使細胞在傳代過程中逐漸喪失貼壁的能力。細胞會從正常的貼壁狀態,邊緣開始上翹。觀察到的現象就是細胞表面不光滑,晃動細胞瓶會看到細胞表面有絮狀物隨培養液波動。隨著傳代次數增加,細胞上翹的情況越來越嚴重,直到終*脫壁而死亡。

4、細胞長的很好,致密的單層,狀態也很正常,但是接毒后細胞基本不發生病變,做滴度檢測幾乎測不出抗原滴度。這種情況也許是因為血清中含有與接種的病毒有同源的特異性抗體。比如血清中經常會存在乙腦抗體,牛腹瀉病毒抗體等,如果存在這些抗體,就會把接進去的病毒給中和掉。如果抗體滴度很高,病毒會被抗體*中和,就沒有毒顆粒在細胞中增殖,所以會檢測不到病毒滴度。這種情況給疫苗企業造成的損失是相當大的,不產毒等于前面所做的那么多工作全部白費,浪費人力、物力,尤其是時間上的浪費,從培養細胞開始到接病毒,到收液至少需要一兩個月,一旦出現不產毒的情況,那么這一兩月時間就白白浪費掉了,這也是牛血清給疫苗企業造成的風險之一。

5、細胞生長的狀態一般,產毒少,毒價低。這種情況比較常見,細胞是病毒的載體,由于血清質量不好,導致細胞生長狀態不好,病毒就無法進行正常的復制。并非所有毒都不能復制,所以就造成疫苗的效價不夠,可能造成不合格產品。

看來一款血清直接關系細胞的生死存亡,不用擔心,上海素冉提供無支原體,低內毒素和低血紅素的,無反復凍融的高品質血清。




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